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蜀科實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)對外泌體的處理

更新時(shí)間:2018-01-03      點(diǎn)擊次數(shù):4798

 要想深挖外泌體的潛能,使其發(fā)揮更大的作用,必先獲得高純度、內(nèi)含物少丟失的外泌體樣本。小編為大家介紹一種快速并分離外泌體的方法——蜀科實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)分離法。
 

超速離心法是常用的外泌體純化手段,在以蜀科低速離心機(jī)離心除去掉死亡細(xì)胞和細(xì)胞碎片后,就通過蜀科高速離心機(jī)將大小相同的囊泡顆粒從可溶性分子如游離蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)復(fù)合物中沉淀并純化出來。重要的是,隨后要用PBS或新鮮生長培養(yǎng)基少一次的清洗外泌體,從而來減少其中游離的殘存蛋白。此外,所有離心步驟必須在4°C下進(jìn)行,借此來保持蛋白酶、DNase和RNases處于非活性狀態(tài),也就是必須使用蜀科的冷凍實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)。

 

通常超速離心也會與蔗糖密度梯度(其密度從低到高的連續(xù)分布)或蔗糖墊(30% sucrose cushion)組合使用,即在離心機(jī)中以100,000-200,000 x g離心沉淀(含有外泌體)120分鐘,可使樣品中的外泌體應(yīng)將以1.13-1.19g/mL的蔗糖密度范圍內(nèi)進(jìn)行富集。

  

盡管這種強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)手的方法可以獲得高度純化的外泌體,但也存在一些缺點(diǎn)。確實(shí),超速離心的過程耗時(shí)耗力,且需要耗費(fèi)大量的原料。而大的缺陷在于重復(fù)離心操作很有可能對外泌體的囊泡造成損害從而降低其質(zhì)量,又或者樣品中的可溶性蛋白可能與外泌體一起形成聚集體和團(tuán)塊進(jìn)而產(chǎn)生污染。

蜀科
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